Thermo 7500定量PCR儀是一種基于實時熒光定量PCR技術(shù)的精密儀器,其核心功能是通過監(jiān)測熒光信號實現(xiàn)對DNA或RNA的準確定量分析。以下從工作原理和優(yōu)點兩方面進行解析:
1.傳統(tǒng)PCR基礎(chǔ):定量PCR技術(shù)以傳統(tǒng)PCR為基礎(chǔ),后者通過高溫變性(95℃,解開DNA雙鏈)、低溫退火(55-65℃,引物結(jié)合目標序列)、適溫延伸(72℃,合成互補鏈)三步循環(huán),使目標DNA片段在短時間內(nèi)擴增至可檢測水平。然而,傳統(tǒng)PCR僅能對終點產(chǎn)物進行定性分析,無法準確量化起始模板量。
2.實時熒光定量機制:定量PCR儀在傳統(tǒng)PCR基礎(chǔ)上引入了熒光標記系統(tǒng)。通過在反應(yīng)體系中加入熒光探針或染料,實時監(jiān)測每個循環(huán)中擴增產(chǎn)物量的變化。熒光信號隨產(chǎn)物積累而增強,儀器通過光學系統(tǒng)采集信號并生成擴增曲線。關(guān)鍵參數(shù)Ct值(循環(huán)閾值)表示熒光信號達到設(shè)定閾值所需的循環(huán)次數(shù),Ct值與起始模板濃度呈負相關(guān),結(jié)合標準曲線即可實現(xiàn)準確定量。
Thermo 7500定量PCR儀的核心優(yōu)點:
1.高靈敏度:可檢測極微量核酸樣本。
2.實時監(jiān)測:動態(tài)追蹤擴增過程,避免終點法的誤差。
3.自動化與高通量:快速完成實驗,適配即時檢測需求。
憑借其精密的工作原理和多維度優(yōu)勢,已成為生命科學研究與臨床診斷中不可少的核心工具,持續(xù)推動著分子檢測領(lǐng)域的發(fā)展。