NanoDrop One 超微量分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)核酸、蛋白等樣品濃度與純度的核心設(shè)備,其檢測(cè)精度高、樣品用量少,做好樣品檢測(cè)的細(xì)節(jié)把控,能有效避免數(shù)據(jù)偏差、保障檢測(cè)結(jié)果可靠,以下是關(guān)鍵注意事項(xiàng):
樣品預(yù)處理與用量把控
檢測(cè)前需確保樣品無(wú)雜質(zhì)、無(wú)氣泡,若樣品中存在顆粒物、纖維等雜質(zhì),需先通過(guò)離心(12000rpm,5-10min)或 0.22μm 濾膜過(guò)濾處理,防止雜質(zhì)附著檢測(cè)探頭影響吸光度讀數(shù);同時(shí)要避免樣品中混入氣泡,否則會(huì)造成數(shù)據(jù)波動(dòng)或無(wú)效讀數(shù)。該設(shè)備僅需 0.5-2μL 樣品即可檢測(cè),取樣時(shí)需用移液槍精準(zhǔn)控制體積,不可過(guò)量(過(guò)量易溢出污染探頭),也不可不足(不足無(wú)法形成完整液柱,導(dǎo)致檢測(cè)失敗);且移液槍槍頭需無(wú)殘留、無(wú)污染,建議一次性使用,防止交叉污染。
檢測(cè)探頭清潔與維護(hù)
檢測(cè)探頭的潔凈度直接決定數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性,每次檢測(cè)前后需用去離子水或適配的溶劑(如檢測(cè)蛋白用緩沖液、檢測(cè)有機(jī)溶劑樣品用無(wú)水乙醇)擦拭探頭表面,去除殘留樣品;若樣品黏性較大(如含高濃度甘油的樣品),需用無(wú)塵棉簽蘸取對(duì)應(yīng)溶劑輕輕擦拭,再用去離子水清潔,最后用無(wú)塵紙吸干水分,嚴(yán)禁刮擦探頭光學(xué)表面。若探頭出現(xiàn)頑固污漬,可使用設(shè)備專用清潔液處理,不可用強(qiáng)酸強(qiáng)堿或粗糙工具清潔,避免損傷光學(xué)元件。
檢測(cè)環(huán)境與參數(shù)設(shè)置
設(shè)備需放置在穩(wěn)定、無(wú)強(qiáng)光直射的環(huán)境中,檢測(cè)時(shí)環(huán)境溫度需控制在 15-30℃,避免溫度劇烈波動(dòng)影響檢測(cè)精度;同時(shí)要保持設(shè)備水平放置,防止樣品液柱因設(shè)備傾斜出現(xiàn)形態(tài)異常。檢測(cè)前需根據(jù)樣品類型正確設(shè)置參數(shù),比如檢測(cè) dsDNA 選擇 A260/A280 模式、檢測(cè)蛋白選擇 A280 模式,還要確認(rèn)基線校準(zhǔn)完成,若基線波動(dòng)超出允許范圍,需重新校準(zhǔn)后再進(jìn)行檢測(cè);對(duì)于特殊樣品(如低濃度核酸、帶熒光標(biāo)記的樣品),需選擇對(duì)應(yīng)檢測(cè)程序,不可用通用模式強(qiáng)行檢測(cè)。
樣品回收與后續(xù)清理
若樣品需回收,需在檢測(cè)完成后立即用潔凈移液槍將樣品從探頭處吸回至原管,操作時(shí)要避免接觸探頭造成二次污染,且回收的樣品需做好標(biāo)識(shí),不可與未檢測(cè)樣品混淆。無(wú)需回收的樣品,需用去離子水徹底清潔探頭和周邊臺(tái)面,防止樣品殘留滋生細(xì)菌或腐蝕設(shè)備;檢測(cè)結(jié)束后,需關(guān)閉設(shè)備檢測(cè)艙蓋,定期清理設(shè)備外殼灰塵,同時(shí)做好檢測(cè)數(shù)據(jù)的備份與記錄,便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)追溯。