微量分光光度計克隆測定奶山羊脂肪酸合酶基因啟動子的全長序列,進(jìn)行活性區(qū)域分析,為奶山羊FAS基因功能和表達(dá)調(diào)控機(jī)理研究提供依據(jù).根據(jù)牛和人脂肪酸合酶基因啟動子的同源序列以及西農(nóng)薩能奶山羊脂肪酸合酶基因5UTR區(qū)域,分別設(shè)計上、下游引物,以西農(nóng)薩能奶山羊全血DNA為模板克隆啟動子序列.依據(jù)生物信息學(xué)分析結(jié)果重設(shè)引物,將FAS啟動子基因分段克隆并連接到熒光素酶表達(dá)載體PGL-3,與Psv-β-半乳糖苷酶對照載體共轉(zhuǎn)染293、MCF-7細(xì)胞,進(jìn)行熒光素酶活性檢測和β-半乳糖苷酶的活性檢測.FAS基因啟動子序列全長2 640 bp,與牛、人FAS啟動子序列同源性90%以上,包括數(shù)個潛在SP1、Ets、LSF等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)和CCAAT框、GC框.-1 040-340 bp處可能包含啟動子活性中心,通過啟動子缺失片段試驗(yàn)將活性中心范圍縮小至-721-540 bp之間.通過克隆FAS基因啟動子區(qū)域,分析表明啟動子前端存在負(fù)調(diào)控元件,找出了啟動子小活性中心。