BD C6流式細(xì)胞儀

流式細(xì)胞儀主要有兩個(gè)基本的用途：*是可以定量分析鑒定活細(xì)胞表面表達(dá)的特異分子，第二是進(jìn)行特定的活細(xì)胞群的分離和純化。

1.  免疫細(xì)胞群的分類靜止淋巴細(xì)胞之間從其外觀形態(tài)難以區(qū)分，都是以致密的核及少量細(xì)胞質(zhì)組成的小而圓的細(xì)胞為特征。然而，這些細(xì)胞確是由功能各異的不同細(xì)胞亞群所組成，各種細(xì)胞群表達(dá)各自特殊的表面分子。例如，B淋巴細(xì)胞上表達(dá)有特異的膜表面免疫球蛋白（mIg），而成熟的T淋巴細(xì)胞表面表達(dá)特異的CD3分子。T淋巴細(xì)胞又可進(jìn)一步按其表達(dá)的不同表面標(biāo)志細(xì)分成不同的亞群，如CD4+CD8-和CD4-CD8+亞群。因此，可由這些特征性的表面標(biāo)志，將細(xì)胞分為不同的群或亞群。

2.  免疫細(xì)胞的分化發(fā)育免疫細(xì)胞分化發(fā)育的不同階段，其表面標(biāo)志也在不斷地發(fā)生著變化。如胸腺細(xì)胞（發(fā)育過程中的T淋巴細(xì)胞），在發(fā)育的不同階段從不成熟到成熟，其表面標(biāo)志經(jīng)歷了從雙陰性（CD4-CD8-）到雙陽性（CD4-CD8-），直到單陽性（CD4+CD8-或CD4-CD8+）的過程。正常生理狀態(tài)下，發(fā)育不同階段的胸腺細(xì)胞以一定的比例存在于胸腺中。通過檢測(cè)這些標(biāo)志，即可判定某些因素（基因突變等）對(duì)胸腺細(xì)胞發(fā)育的影響。

3.  免疫細(xì)胞的分子表達(dá)免疫細(xì)胞的不同因素的影響下，其表達(dá)的分子也會(huì)發(fā)生變化。通過檢測(cè)這些分子的變化，可分析細(xì)胞功能以及細(xì)胞分化狀態(tài)等。例如，靜止的T淋巴細(xì)胞不表達(dá)或低水平表達(dá)CD69分子；而一經(jīng)活化，其表達(dá)CD69分子數(shù)量明顯增加。因此，可通過檢測(cè)這些活化標(biāo)志的變化來判定細(xì)胞狀態(tài)以及研究影響細(xì)胞活化狀態(tài)的因素。

BD C6流式細(xì)胞儀
4.  免疫細(xì)胞的分離如前所述，免疫細(xì)胞是一組極不均一的群體。所以在研究免疫細(xì)胞功能時(shí)，常常需要把某些特異的細(xì)胞分離和純化。雖然免疫細(xì)胞分離的方法很多，但用FACS來純化特定的細(xì)胞群是目前為有效和方便的手段。例如，近頗受關(guān)注的CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞是一群具有免疫調(diào)節(jié)（免疫抑制）功能的細(xì)胞群。在對(duì)其特點(diǎn)及功能進(jìn)行研究時(shí)，首要的問題是分離該細(xì)胞群。用相應(yīng)的單克隆抗體與其結(jié)合，再用FACS進(jìn)行分離，就能得到純度很高CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞細(xì)胞群。而其他分離方法不僅分離過程煩瑣，也很難控制無菌條件及保證細(xì)胞純度。

BD C6流式細(xì)胞儀（flowcytometer）是一種能夠探測(cè)和計(jì)數(shù)以單細(xì)胞液體流形式穿過激光束的細(xì)胞檢測(cè)裝置，由于在檢測(cè)中使用的細(xì)胞標(biāo)志示蹤物質(zhì)為熒光標(biāo)記物，因此，用來分離、鑒定細(xì)胞的流式細(xì)胞儀有被稱為熒光激活細(xì)胞分類儀（fluorescenceactivatedcellsorter，F(xiàn)ACS），是分離和鑒定細(xì)胞群及亞群的一種強(qiáng)而有力的應(yīng)用工具。

其原理是在一組混合的細(xì)胞群中，加入特異的針對(duì)特定靶細(xì)胞表面分子的熒光標(biāo)記單克隆抗體，這種特異單克隆抗體與其對(duì)應(yīng)的抗原靶分子結(jié)合，結(jié)合后的熒光標(biāo)記抗體停留在特定細(xì)胞的表面，稱為熒光抗體標(biāo)記的靶細(xì)胞；將含有被標(biāo)記細(xì)胞的混合細(xì)胞群混懸在一定容積的上樣緩沖液中，再通過FACS的進(jìn)樣吸管孔，儀器就會(huì)將細(xì)胞懸液制成以單細(xì)胞排列的微細(xì)流束。

當(dāng)每一個(gè)細(xì)胞通過儀器的激光束照射時(shí)，帶在細(xì)胞上的熒光就會(huì)被相應(yīng)的激光束激活并發(fā)出對(duì)應(yīng)的熒光，通過敏感的光電倍增管即可檢測(cè)到從細(xì)胞表面發(fā)出的熒光。根據(jù)測(cè)得的散射光（scatteredlight）可得到細(xì)胞大小及顆粒狀態(tài)的信息；而從熒光的發(fā)射強(qiáng)度（fluorescenceemissions）則提供了結(jié)合在細(xì)胞上的抗體信息，進(jìn)而也被反映了該細(xì)胞表面相應(yīng)分子的表達(dá)情況。

在流式細(xì)胞儀分離裝置中，返回到計(jì)算機(jī)的信號(hào)，可用來產(chǎn)生一種電荷，這種電荷以特定準(zhǔn)確的時(shí)間通過FACS的吸管孔，在與吸管孔的液體流相相遇時(shí)，可將液體流打碎成只含一個(gè)細(xì)胞的微滴。含有電荷的微滴就會(huì)從主液體流中偏移，穿過一雙極板。帶正電荷的微滴被吸引至陰極，而帶負(fù)電荷的被吸引至陽極。以這種方式，特定的細(xì)胞亞群由于標(biāo)記著不同的熒光抗體而帶有不同的電荷，從而將目的細(xì)胞從混合的細(xì)胞群中分揀出來。